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薄层色谱法常常用做监控分析的手段,食品中真

文章作者:41668澳门金沙 上传时间:2019-09-26

41668澳门金沙,■近年来,我国食品安全检测技术的研究与开发取得了明显发展。 近年来,我国科研院所、高等院校就食品安全检测技术的研究与开发取得了明显的进展。 色谱检测技术的研究与应用普遍发展。色谱法创立已有近100年的历史,但一直到20世纪40年代中期,仍然是人们所采用的唯一一种色谱方法。1952年,气相色谱法被提出,使色谱法的发展前进了一大步,由于应用面广泛而受到人们的重视。目前,气相色谱和高效液相色谱已作为色谱分析化学技术在食品安全检测中广泛应用。借助高效液相色谱对食品中生物胺及其产生菌珠检测方法的研究,以及采用高效液相色谱仪———光电二极管阵列检测器作为检测手段,可以对食品中有害的色素苏丹红和4种四环素类抗生素定性定量的分析。 生物检测技术研究与应用广泛开展。以PCR基因扩增技术、免疫学技术和生物芯片技术为代表的生物检测技术近年来在食品安全检测中蓬勃发展。传统的微生物检测方法主要依赖于微生物的富集培养、选择性分离和生化鉴定,操作烦琐、时间冗长、检出效率及灵敏度低、容易出现假阴性。使用PCR多聚酶链式反应检测技术,使DNA在体外合成放大可以快速地在体外扩增任何DNA,以检测微量有害成分。 酶联免疫吸附法始于20世纪70年代,是一种把抗原和抗体的特异性免疫反应和酶的高效催化作用有机结合起来的检测技术。随着单克隆抗体技术的发展应用及免疫试剂盒的商业化,ELISA已广泛应用于食品分析检测中。这些方法前处理步骤复杂、费时费力、设备昂贵、不适宜大量样品现场检测的问题,采用这种方法,旨在快速检测半抗原,方法简便,灵敏度高。 基因芯片技术是分子生物学技术与芯片技术相结合产生的一项高新技术。基因芯片制备及检测流程,是利用原位合成法或将已合成好的一系列寡核甘酸以预先设定的排列方式固定在固相支持介质表面,形成高密度的寡核甘酸的阵列,样品与探针杂交后,由特殊的装置检出信号,并由计算机进行分析得到结果,其在转基因食品及食品中的微生物的检测有广泛的运用。 除上述之外,还有利用发光细菌发光原理,发光细菌在接触农产品(12.90,0.70,5.74%,吧)中致毒污染物后发光受抑制的现象,采用二次多因子回归,运用旋转组合设计和统计学方法,运用SAS和MINITAB软件构建了一套发光细菌法多污染混合物的联合毒性快速检测方法,此法可揭示多种农产品污染物共存时产生的联合毒性作用以及综合生物毒性和主因子作用。 光学检测技术的研究与运用迅猛发展。共振光散射技术因其灵敏度好、实验仪器简单、检测方便等优点而备受分析化学研究者青睐。在食品安全检测及其生化药物分析中有广泛的用途,应用化学发光现象在食品安全检测中的运用研究近年来也屡有报道。利用低温等离子体辉光几种特性来检测食品中有毒物质的新方法,使常规的食品安全检测方法也有了突破。除此之外,近红外光谱技术在果蔬、肉制品检测及其他方面都有独到的优势和广阔的发展前景。 快速检测技术与样品前处理技术的突破,是当前食品安全检测技术的研究热点。食品安全检测普遍存在检验程序复杂、检测周期漫长、检测成本昂贵、检验人员专业素质要求较高等特点,大大限制了现场监督和通关检验的效率。时效性困扰着食品安全检测作用的充分发挥。近年来,快速检测技术研究颇为广泛,如利用超声波快速检测仪具有非破坏性、精确、设备低廉、能够快速对高浓度液体和光不透明材料进行检测,如牛奶成分的分析检测;另外,根据抗体胶体金与被检测物结合形成稳定的肉眼可见结合物,在一定波长范围内具有最大吸收峰实现胶体金的定量检测的原理,快速检测食品中鼠疫耶尔森菌也有报道。 食品安全检测分析存在两大问题:一是样品前处理技术,二是分析检测技术,其中样品前处理技术是前置的关键技术。由于食品基体复杂,有害污染物含量极微,同时越来越严格的最大残留限量标准对分析方法的检出限提出了更高要求,使得复杂的食品基体中有害残留的分析需要更为有效的前处理方法。样品前处理是目前食品分析较复杂和最薄弱的环节,因此成了较热门的前沿研究课题。

中国化工仪器网 本网视点】自1906年Tswett提出色谱法概念至今,色谱技术已经成为分析科学领域重要的技术之一,也是物质分离分析的重要手段,色谱对科学的进步和生产的发展起着重要的作用。因该技术具有分离效果高、应用范围广、分析速度快、灵敏度高等优点,在石油化工、有机合成、医药分析、环境检测等领域的应用日益普遍,几乎在所有的领域都涉及到色谱法及其相关技术的应用。 从经典的平板色谱到柱色谱法,从气相色谱法、液相色谱法到毛细管电泳和电色谱等,无论哪种色谱方法都在科学研究和工业生产中发挥着重要作用。随着色谱技术的应用越来越广,众多学者专家对色谱技术所开展的研究也越来越深入,下面就给大家简单介绍几种常用的色谱法。 薄层色谱法 薄层色谱法是一种应用非常广泛的色谱方法,因具有设备简单,操作方便,分离效率和检出灵敏度都比较高等优点,深受广大用户欢迎。并且薄层色谱法的所有步骤是独立的,灵活性非常高,薄层板是一次性使用的,单个样品的分析成本较低,因此这种方法在医药、生物、环境、食品等方面有着广泛的应用。 在药品质量监控中,薄层色谱法不仅可以测定药物的纯度,对中药材和中成药,还能的鉴别其有效成分,并进行含量的测定。在合成工艺领域,薄层色谱法常常用做监控分析的手段,经常用做对环境有害物质的分析、食品的天然营养成分的分析、食品添加剂的分析以及某些真菌毒素的分析等等。 气相色谱 气相色谱是二十世纪五十年代出现的一项重大科学技术成就。这是一种新的分离、分析技术,也是目前十分重要的检测技术之一。气相色谱法具有分离能力好,灵敏度高,分离速度快,操作方便等优点,但是受技术条件的限制,沸点太高的物质或稳定性差的物质都难以应用气相色谱分析法。 该技术一般广泛用于500℃以下不易挥发或受热易分解的物质。在食品安全检测等领域发挥了非常重大的作用,利用气相色谱技术检测有蔬菜中农药残留、酒水中的有害组分及挥发性气体、食品包装中的有毒物质等等。在环境保护方面,气相色谱技术常常用于对于大气、水源等污染地的毒物分析、监测和研究。 液相色谱 液相色谱法是现代应用多的色谱分析方法之一,液相色谱系统由流动相储液瓶、输液泵、进样器、色谱柱、检测器和记录器组成,其整体组成类似于气相色谱,但是,针对其流动相为液体的特点作出很多调整。液相色谱的输液泵要求输液量稳定平衡,进样系统要求进样便利、切换严密。由于液体流动相黏度远远小于气体,为了减低柱压,液相色谱的色谱柱一般比较粗,长度也远小于气相色谱柱。 由于液相色谱法具有高压、、高灵敏度、分析速度快、载流速度快等特点,因此百分之七十以上的有机化合物都可用液相色谱分析。特别是针对于高沸点、大分子、强极性、热稳定性差的化合物的分离分析更具优势,分离效能极高。 色谱技术与我们的生活息息相关,随着色谱技术的不断完善,色谱分析也逐渐应用到更多的领域,它独特的检测优势给我们未来生活带来了巨大的影响。在此我们也祝愿色谱技术能够拥有更大的发展空间,为我国的科技发展做出更多贡献。

黄曲霉毒素(aflatoxin,AF)是由黄曲霉(Aspergillus flavu)和寄生曲霉(Aspergillus parasiticus)经聚酮途径所产生的含有二呋喃环和氧杂萘邻酮结构相似的一组有毒次生代谢产物[1]。AF对人体健康具有急性、慢性、致癌、免疫抑制等多种毒性危害作用,自然条件下产生的AF主要包括B1、B2、G1、G2四种,且这4种毒素残留对人体健康的毒性往往具有协同和加性效应,实施黄曲霉毒素总量(total aflatoxins,TAFs)检测已成为当前食品质量安全检测领域发展的必然趋势[2]。针对这一新的限量要求及在食品国际贸易中的作用,世界上许多国家都展开了TAFs最大残留限量(maximum residue limit,MRL)及检测方法的研究,至 2013 年已有 91 个国家制定了TAFs在不同食品中的MRL,如国际食品法典委员会和美国食品与药物监督管理局等规定食品中TAFs的MRL为15 μg/kg,日本为10 μg/kg,欧盟为4 μg/kg,我国现行的《GB 2761—2011 食品中真菌毒素限量》标准中规定了AFB1的限量标准,尚未涉及TAFs限量要求,但在《GB/T 5009.23—2006 食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定》标准中规定了TAFs限量检测方法[3]金沙js娱乐场官方网站,。

食品中TAFs检测方法目前主要有生物分析法(bioassay,BA)、理化分析法(physicochemical analysis,PCA)和免疫分析法(immunoassay,IA)三种,本文就食品中TAFs检测方法的研究进展、应用情况、技术优势与缺陷及今后的发展趋势进行探讨,旨在为食品TAFs检测方法的选择使用和发展完善提供借鉴和思路。

1 生物分析法

BA的基本原理是通过生物体实验来验证样品的毒性部位和毒性机理,以染毒动物摄入后胆管异常增生程度为主要根据,判断毒物含量的多少[4]。此法最早应用于雏鸭,后经不断发展,派生出其他的生物分析法,主要包括鸡胚法、软体动物卵试验法、组织培养法、豚鼠鉴定法、皮肤毒性实验法、种子发芽实验法、微生物鉴定法等。BA的优点是对样品纯度要求不高,设备要求简单。其缺点是专一性不强,灵敏度较低,操作繁琐,费用较高,目前除在机体对毒素耐受性和毒理学研究应用外,实际检测中已很少使用[5]。

2 理化分析法

目前各国主要采用的理化分析方法有薄层色谱法(thin layer chromatography,TLC)、高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)、高效液相色谱-串联质谱法(high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)、时间分辨荧光分析法(time resolved fluoroisnmunoassay,TRFIA)等,分述如下。

2.1 薄层色谱法

TLC的基本原理是将样品经过提取、浓缩、薄层分离后,在365 nm紫外激发显色,其中B1、B2产生蓝紫色荧光,G1、G2产生黄绿色荧光,以此来确定TAFs,为半定量分析方法[6]。该方法于1963年由BROADBENT等[7]建立,后经不断发展,根据其展开方法又分为单向展开法和双向展开法,后者灵敏性更好。TCL的优点是所需仪器设备简单,操作简便,易于普及,是TAFs检测较为经典的方法,目前国内外仍在使用。其缺点是样品前处理复杂,操作繁琐,耗时耗力,干扰因素多,测定结果的准确性差。ROBB等[8]采用该方法检测样品中TAFs,B1、B2、G1、G2的检测限(limit of detection,LOD)均可达到0.5 μg/kg。1990年,该方法被美国官方分析化学家协会(Association of Official Agricultural Chemists,AOAC)列为标准方法[9]。我国国家标准中《食品黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定》仍采用TLC法[10]。OTTA等[11]于2000年研究报道了过压薄层色谱法(overpressured-layer chromatography,OPLC),可同时检测食品中B1、B2、G1和G2,实现了TAFs检测,检测灵敏度达1 μg/kg,符合欧盟对食品TAFs的MRL标准。

2.2 高效液相色谱法

HPLC的原理是样品经过净化后,在适宜的流动相下,采用反相C18色谱柱对TAFs进行分离,依据每种AF的荧光特性,在荧光检测器作用下,实现TAFs的定性和定量检测[12]。该方法由RAO等于1973年建立,可同时检测B1、B2、G1、G2,LOD为1 μg/kg,后经不断发展,派生出正相液相色谱法(normal phase HPLC,NP-HPLC)和反相液相色谱方法(reversed phase HPLC,RP-HPLC),其中RP-HPLC 的灵敏性与稳定性更好,RP-HPLC更受使用者青睐,但RP-HPLC对AF分子具有选择性,即对B2、G2的灵敏度高,而B1和G1的荧光强度在含水的溶剂中容易发生淬灭致使灵敏度很低甚至无法检出,需要进行柱前或柱后衍生以增强其荧光性[13]。HPLC的优点是分辨率高,结果可靠,灵敏度高,能够自动化操作,适于大批量样品的定性、定量和多元分析,是国内外食品TAFs定量检测方法中最权威、最易被接受的方法。其缺点是仪器设备昂贵,技术水平要求高,样品需要进行前处理,不适合快速、现场检测[14]。朱鹏飞等[15]采用三氟乙酸柱前衍生-RP-HPLC测定食品中TAFs,结果表明,对B1、G1的LOD为0.1 μg/kg,对B2、G2的LOD为0.03 μg/kg,精密度为0.13%~9. 5%,加标回收率为70%~106%。吴燕等[16] 采用化学柱后衍生-RP-HPLC测定粮谷类食物中TAFs,结果表明,对B1、B2、G1、G2的LOD分别为0.50 μg/kg、0.15 μg/kg、0.50 μg/kg和0.15 μg/kg,加标回收率为86.7%~97.2%。无论柱前或柱后衍生,RP-HPLC灵敏度高,重现性好,能够很好满足食品中TAFs检测的需要。

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